２０１３年４月第５ｌ卷第ｌ１期 ・综 。 述】 。・ ｍｉＲＮＡ－急性肺损伤中新的调控分子 雷马文 王德明 南华大学附属第二医院麻醉科，湖南衡阳４２１００１ 【摘要】急性肺损伤（Ａｕ）及更为严重的急性呼吸窘迫综合征（ＡＲＤｓ）为常见且复杂的炎症性肺疾病。微小ＲＮＡ （ｍｉｃｍＲＮＡ或ｍｉＲＮＡ或ｍｉＲ）已作为一类全新的基因调控分子脱颖而出，其在包括ＡＬＩ在内的多种复杂性疾病 当中起着至关重要的作用。 ［关键词】ｍｉＲＮＡ；急性肺损伤 【中图分类号】Ｒ７２５．６ 【文献标识码】Ａ 【文章编号】１６７３－９７０１（２０１３）１１—００２７－０２ ｍｉＲＮＡ：Ａ ｎｏｖｅｌ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｉｎ ａｃｕｔｅ ｌｕｎｇ ｉｎｊｕｒｙ ＬＥ／Ｍａｗｅｎ ＷＡＮＧ Ｄｅｍｉｎｇ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ａｎｅｓｔｈｅｓｉａ，ｔｈｅ Ｓｅｃｏｎｄ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｎａｎｈｕａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈｅｎｇｙａｎｇ ４２１００１，Ｃｈｉｎａ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ａｃｕｔｅ ｌｕｎｇ ｉｎｊｕｒｙ（ＡＬＩ）ａｎｄ ｔｈｅ ｍｏｒｅ ｓｅｖｅｒｅ ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｄｉｓｔｒｅｓｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ（ＡＲＤＳ）ａｒｅ ｃｏｍｍｏｎ ａｎｄ ｃｏｍｐｌｅｘ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｌｕｎｇ ｄｉｓｅａｓｅｓ．ｍｉｃｒｏＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ／ｍｉＲ）ｈａｖｅ ｅｍｅｒｇｅｄ ａｓ ａ ｎｏｖｅｌ ｃｌａｓｓ ｏｆ ｇｅｎｅ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ ｗｈｉｃｈ ｐｌａｙ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｒｏｌｅｓ ｉｎ ｍａｎｙ ｃｏｍｐｌｅｘ ｄｉｓｅａｓｅｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ＡＬＩ． 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】ｍｉＲＮＡ；Ａｃｕｔｅ ｌｕｎｇ ｉｎｊｕｒｙ 急性肺损伤（ａｃｕｔｅ ｌｕｎｇ ｉｎｊｕｒｙ，ＡＬＩ）及更为严重的急性 亡因子４（ｐｒｏ￣ａｍｍｅｄ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ４，ＰＤＣＤ４）表达。接着发现． 在细胞被转染以ｍｉＲ一２１前体后，再接受ＬＰＳ刺激，ＮＦ—ＫＢ 潘 会被抑制且ＩＬ－１０的产生会增加。但当转染的是ｍｉＲ－２１ 的反义寡核苷酸时，结果则截然相反［９１。此外，一个微小ＲＮＡ 介导基因表达调控的新机制（即经由与ＲＮＡ结合蛋白竞争） 呼吸窘迫综合征（ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｄｉｓｔｒｅｓｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＡＲＤＳ） 为常见而重要的快速进行性炎症性肺疾病。据估计，仅仅美 国每年就有１９０ ０００例ＡＬＩ新发病例，其中死亡病例约为 ７５ ０００例。而在中国，ＡＬＩ／ＡＲＤＳ的发病率更高，病死率更是 高达５２％ｔＩ． 。近年．科学家已注意到ｍｉＲＮＡ在ＡＬＩ／ＡＲＤＳ的 近来已被发现。这在免疫炎症研究中的典型例子为ｍｉＲ一 细胞效应中上调ＩＬ＿１Ｏ表达正是通过此机制来实现的［１０１。 １．２ ｍｉＲＮＡ与ＡＬＩ 诸多生物学进程和信号转导途径中起着重要作用。本文将 ４４６Ｉ在Ｔ细胞受体（Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＴＣＲ）活化触发的巨噬 重点介绍ｍｉＲＮＡ在免疫炎症及Ａｕ中所发挥的作用。 １ ｍｉＲＮＡ在免疫反应和ＡＬｌ中的作用 新近研究表明，ｍｉＲ一１５０参与了ＡＬＩ炎症过程。机体 接受ＬＰＳ刺激后，ｍｉＲ一１５０在肺部表达明显下调。ｍｉＲ一１５０ 的靶标可能是白介１受体相关激酶２（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ一１ ｒｅｃｅｐ． ｔｏｒ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｋｉｎａｓｅ ２。ＩＲＡＫ２）．而后者是胞内调节炎症反 已经发现具有调节免疫细胞发育和分化功能的是 ｍｉＲ一１８ｌａ，它在胸腺中高表达而在淋巴结和骨髓中表达水 平较低 。与此同时，某些炎症性肺疾病（如哮喘、特发性肺 纤维化）的发病也与ｍｉＲＮＡ有关。因此，我们推测ｍｉＲＮＡ 可能潜在地影响ＡＬＩ／ＡＲＤＳ的发生发展。 １．１ ｍｉＲＮＡ与免疫炎症反应 应的重要信号分子Ｉ”Ｉ。Ｃａｉ等１ 的研究显示，在ＬＰＳ诱导的 小鼠ＡＬＩ模型中多个ｍｉＲＮＡ在肺中的表达被动态地调节。 其中ｍｉＲ－２１４、ｍｉＲ－４１５的表达明显上调，ｍｉＲ一１８ｌａ／ｂ、ｍｉＲ一 １９９ａ和ｍｉＲ一１６的下调最为显著。他们进一步的研究发 现，上调ｍｉＲ一１６表达可抑制肺部炎症反应，而这一作用正 是通过其靶向ＴＮＦ一０ｌ来实现的＿ｌ２Ｉ。Ｘｉｅ等Ｉ 研究者又指出， 在同有免疫中．ｍｉＲ一２００ｂ和ｍｉＲ一２００ｃ可经由靶向髓 分化因子８８（ｍｙｅｌｏｉｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ８８，ＭｙＤ８８）调控 ＴＨＰ一１巨噬细胞ＴＬＲ４通信和ＮＦ—ＫＢ活化的效能，从而影 响宿主抗病原微生物的天然防御功能１４，５１。通过ＴＬＲ３、ＴＬＲ４ 及ＴＬＲ９激动剂的激活而诱导ｍｉＲ一１４８与ｍｉＲ一１５２的表 达将抑制包括ＴＮＦ一０【、ＩＬ一６、ＩＬ一１２在内的多种炎症介质的 产生１６１。在ＬＰＳ激活ＴＬＲ４后，ｍｉＲ一２１０可直接靶向ＮＦ—ＫＢｌ 而负向调节ＬＰＳ诱导的小鼠巨噬细胞促炎细胞因子的产 生 。据此，我们推测在ＴＬＲ激活后会诱导ｍｉＲＮＡ（￣ＨｍｉＲ一 １４７、ｍｉＲ一９、ｍｉＲ一１４８、ｍｉＲ～１５２、ｍｉＲ一２１０）的表达，借此来 在博来霉素诱导的小鼠ＡＬＩ模型中ｍｉＲ一１２７表达明显降 低。从以上信息得知，ＬＰＳ和博来霉素等致病因素也许能 够通过调节炎症相关ｍｉＲＮＡ（￣Ｉ ｍｉＲ－１５０、ｍｉＲ一１６、ｍｉＲ一１２７） 表达来促进ＡＬＩ的发生发展。这也暗示：对这些靶ｍｉＲＮＡ进 行调节干预可能是防治ＡＬＩ的新策略。 研究者利用ＴａｑＭａｎ ｍｉＲＮＡ微阵列分析Ｉ Ｉ比较了对照 组与ＨＴＶ处理组小鼠间３６５个ｍｉＲＮＡ的表达水平。发现 ｍｉＲＮＡ表达变化与ＨＴＶ处理周期长短一致．提示ＶＩＬＩ对 抑制过度炎症反应，以利于免疫自稳和免疫调节的维持。 ＬＰＳ或ＴＮＦ—Ｏｔ刺激后所引起的ｍｉＲ一１２５ｂ表达的下调表 ｍｉＲＮＡ表达具有直接的抑制作用，由此而给我们提供了治 明，ｍｉＲ一１２５ｂ可能在针对内毒素休克的免疫应答中发挥 疗ＶＩＬＩ的潜在新靶标。值得提出的是，ＶＩＬＩ肺中ｍｉＲＮＡ的 重要作用［８１。最新研究发现，ＬＰＳ刺激实验中ｍｉＲ一２ １调控凋 表达改变也能来自浸润的炎症细胞，因此，可能还需要更 【基金项目】湖南省自然科学基金资助项目（１１ＪＪ３１２０） 深入地研究以综合地评价这些观察结果。 ＣＨＩＮＡ ＭＯＤＥＲＮ ＤＯＣＴＯＲ中国现代医生２７ 综 述 ２０１３年４月第５１卷第１１期 ２ ｍｉＲＮＡ可作为ＡＬｌ中的分子治疗靶标和生物标志物 Ｔ ｃｅｌｌ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ，２０１０，１２９：１４７—１６１． ｍｉＲＮＡ表达改变与免疫反应、炎症信号通路及包括 ＡＬＩ在内的炎症性肺疾病的发病相关联．因此．将ｍｉＲＮＡ 作为一全新的治疗靶标很有前景。虽然南ｍｉＲＮＡ引起的 相关基因表达变化通常是适度的，但是其结果可能会影响 到大量的后续基因的表达，继而影响多种生物学过程，因 此用ｍｉＲＮＡ作为其中的标志物便成了可能。 已有证据表明，ｍｉＲＮＡ的表达是动态的，其反映着细 ［４］Ｗｅｎｄｌａｎｄｔ ＥＢ，Ｇｒａｆｔ ＪＭ，Ｇｉｏａｎｎｉｎｉ ＴＬ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ ｍｉＲ一２００ｂ ａｎｄ ｍｉＲ一２００ｅ ｉｎ ＴＬＲ４ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ａｎｄ ＮＦ－ＫＢ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ［Ｊ］． Ｉｎｎａｔｅ Ｉｍｍｕｎ，２０１２，１８（６）：８４６—８５５． 【５】５ Ｔａｇａｎｎｖ ＫＤ，Ｂｏｌｄｉｎ ＭＰ，Ｃｈａｎｇ ＫＪ，ｅｔ ａ１．ＮＦ－ｋａｐｐａＢ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｉｎ— ｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｍｉｃｒｏＲＮＡ ｍｉＲ一１４６，ａｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｔａｒｇｅｔｅｄ ｔｏ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐｒｏ ｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｎｎａｔｅ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｅｉ ＵＳＡ，２０１０， １０３（３３）：１２４８１一ｌ２４８６． ［６】Ｌｉｕ Ｘ，Ｚｈａｎ Ｚ，Ｘｕ Ｌ，ｅｔ ａ１．ＭｉｅｒｏＲＮＡ一１４８／１５２ ｉｍｐａｉｒ ｉｎｎａｔｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ａｎｄ ａｎｔｉｇｅｎ ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ＴＬＲ——ｔｉｇｇｅｒｅｄ ｄｅｎｄｒｉｒｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ 胞内外环境和信号的变化，因此，应用ｍｉＲＮＡ作为生物标 志物来代表特定的疾病状态或其不同发展阶段中深层的 病理生理进程很具潜力。此外，在多种标本（如组织、血液 ＣａＭＫｌＩａｌｐｈａ［Ｊ］．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０１１，１８５（１２）：７２４４—７２５１． ［７］Ｑｉ ＪＮ，Ｑｉａｏ Ｙ，Ｗａｎｇ Ｐ，ｅｔ ａ１．ｍｉｃｒｏＲＮＡ－２１０ ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ＬＰＳ—ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ｂｙ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ 或其它体液）中ｍｉＲＮＡ均能被检测到。ｍｉＲＮＡ亦相当稳 定，且几乎不受样品处理误差的影响，这使得ｍｉＲＮＡ在用 作现实的生物标志物时更具吸引力。已有研究者将血浆中 的ｍｉＲＮＡ．作为生物标志物来诊断和监测包括ＡＬＩ在内的 多种炎症性肺疾病，用循环血ｍｉＲ一１２６、ｍｉＲ一１７ ９２簇（包 括ｍｉＲ一１７、ｍｉＲ一１８ａ、ｍｉＲ一１９ａ、ｍｉＲ一２０ａ、ｍｉＲ一１９ｂ一１、 ＮＦ－ＫＢ１ ｉｎ ｍｕｒｉｎｅ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ［Ｊ］．ＦＥＢＳ，２０１２，５８６：１２０１－１２０７． ［８】Ｔｉｌｌ Ｅ，Ｍｉｃｈａｉｌｌｅ ＪＪ，Ｃｉｍｉｎｏ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｉＲ一１ ５５ ａｎｔｉ ｍｉＲ一１ ２５ｂ ｌｅｖｅｌｓ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｅｅｈａｒｉｄｅ／ＴＮＦ－ａｌｐｈａ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｒｏｌｅｓ ｉｎ ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ ｓｈｏｅｋ［Ｊ】． Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０１ １，１７９（８）：５０８２—５０８９． 【９】Ｓｈｅｅｄｙ ＦＪ，Ｐａｌｓｓｏｎ—ＭｃＤｅｒｍｏｔｔ Ｅ，Ｈｅｎｎｅｓｓｙ ＥＪ，ｅｔ ａ１．Ｎｅｇａｔｉｖｅ ｒｅｇｕ一 ［ａｔｉｏｎ ｏｆ ＴＬＲ４ ｖｉａ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｔｕｍｏｒ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｍｉＲ一９２ａ）、ｍｉＲ一１３０、ｍｉＲ一２１和ｍｉＲ一２２ｌ作为生物标志物 来预测ＡＬＩ／ＡＲＤＳ患者肺血管（尤其是毛细血管）功能及其 修复再生状况 ｌ ３展望 ＰＣＤ４ ｂｙ ｔｈｅ ｍｉｅｒｏＲＮＡ ｍｉＲ－２１［Ｊ］．Ｎａｔ ｈｎｍｕｎｏｌ，２０１０，１ １（２）：１４１— １４７． 【１０】Ｍａ Ｆ，Ｌｉｕ Ｘ，Ｌｉ Ｄ，ｅｔ ａ１．ＭｉｃｒｏＲＮＡ－４６６Ｉ ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｓ ＩＬ一１０ ｅｘｐｒｅｓ－ ｓｉｏｎ ｉｎ ＴＬＲ——ｔｉｇｇｅｒｅｄ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓｒ ｂｙ ａｎｔａｇｏｎｉｚｉｎｇ ＲＮＡ－ｂｉｎｄｉｎｇ 当前有关ｍｉＲＮＡ与ＡＬＩ／ＡＲＤＳ关系的研究尚处于早 期阶段，将当前研究扩展到人肺组织、器官，直至人类个体 则会给人们提供ｍｉＲＮＡ在ＡＬＩ／ＡＲＤＳ中的作用更为直接 ｐｒｏｔｅｉｎ ｔｒｉｓｔｅｔｒａｐｒｏｌｉｎ—ｍｅｄｉａｔｅｄ ＩＬ－１０ ｍＲＮＡ ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ Ｉｍ— ｍｕｎｏｌ，２０ｌ１，１８４（１１）：６０５３—６０５９． 【１１】Ｓｃｈｍｉｄｔ ＷＭ，Ｓｐｉｅｌ ＡＯ，Ｊｉｌｍａ Ｂ，ｅｔ ａ１．Ｉｎ ｖｉｖｏ ｐｒｏｆｉｌｅ ｏｆ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ ｍｉｃｒｏＲＮＡ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｅｎｄｏｔｏｘｅｍｉａ［Ｊ］．Ｂｉｏｅｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｎｍｎ，２Ｏ１１，３８０（３）：４３７—４４１． 【１２】Ｃａｉ ＺＧ，Ｚｈａｎｇ ＳＭ，Ｚｈａｎｇ Ｙ，ｅｔ ａ１．ＭｉｃｒｏＲＮＡｓ ａｒｅ ｄｙｎａｍｉｃａｌｌｙ ｒｅｇ－ 可靠的证据。并可以断言，ｍｉＲＮＡ将成为我们充分认识 ＡＬｌ发病机制及其基因调控网络的关键要素。不过，在将 ｍｉＲＮＡ作为新的治疗靶点和生物标志物用于ＡＬＩ的日常 诊疗之前还需要我们继续加强研究。 【参考文献】 ［１ ｊ Ｒｕｂｅｎｆｅｌｄ ＧＤ，Ｃａｌｄｗｅｌｌ Ｅ，Ｐｅａｂｏｄｙ Ｅ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ａｎｄ ｏｕｔｃｏｍｅｓ ｕｌａｔｅｄ ａｎｄ ｐｌａｙ ａｎ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｒｏｌｅ ｉｎ ＬＰＳ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｌｕｎｇ ｉｎｊｕｒｙ ｌＪ］． Ｃａｎ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｐｈａｒｍａｅｏｌ，２０１２，９０：３７—４３． 【１３】Ｘｉｅ Ｔ，Ｌｉａｎｇ ＪＲ，Ｌｉｕ ＮＳ，ｅｔ ａ１．ＭｉｅｒｏＲＮＡ－１２７ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｌｕｎｇ ｉｎｆｌａｍ— ｍａｔｉｏｎ ｂｙ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ＩｇＧ Ｆｃ ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｉ…．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０１２，１８８： ２４３７—２４４４． 【１４１ Ｖａｐｏｒｉｄｉ Ｋ，Ｉｌｉｏｐｏｕｌｏｓ Ｄ，Ｆｒａｎｃｉｓ ＲＣ，ｅｔ ａ１．ＭｉｅｒｏＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａｃｕｔｅ ｌｕｎｇ ｉｎｊｕｒｙＩＪ］．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ，２００５，３５３（１６）：１６８５一ｌ６９３． Ｉ２１ ｊＥ京市科委重大项目ＭＯＤＳ课题组．１９９８—２００３年北京地区重症 ｐｒｏｆｉｌｅ ｉｎ ａ ｍｕｒｉｎｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｖｅｎｔｉｌａｔ０ｒ—ｉｎｄｕｃｅｄ ｌｕｎｇ ｉｎｊｕｒｙ［Ｊ］．Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ，２０１０，１８１（１）：Ａ２０３１． 加强治疗病房急性呼吸窘迫综合征的临床流行病学调查【ｊ】．中国 危重病急救医学，２００７，ｌ９（４）：２０１—２０４． １３ｌ Ｊ ｉ ＱＪ，Ｆｕ ＫＴ，Ｃｈａｎ ＥＫ，ｅｔ ａ１．ＭｉＲ－ｌ８ｌａ ｉｓ ａｎ ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ：ｍｏｄｕｌａｔｏｒ ｏｆ 【１５】ＭｃＬｅａｎ ＡＳ，Ｈｕａｎｇ ＳＪ．Ｃａｒｄｉａｃ ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ ｃａｒｅ ｕｎｉｔ［Ｊ］． Ａｎｎ Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ Ｃａｒｅ，２０１２，２（８）：１—１ １． （收稿｝Ｉ期：２０１２一Ｉ Ｉ一１４） ・编读往来・ 关于计量资料中的ｔ检验 有单样本ｔ检验、配对ｔ检验和两样本ｔ检验。单样本ｔ检验：是用样本均数代表的未知总体均数和已知总体 均数进行比较，来观察此组样本与总体的差异性。配对ｔ检验：是采用配对设计方法观察以下几种情形：①两个同 质受试对象分别接受两种不同的处理；②同一受试对象接受两种不同的处理；③同一受试对象处理前后。从两研 究总体中随机抽取样本，要对这两个样本进行比较的时候，首先要判断两总体方差是否相同，即方差齐性。若两 总体方差相等，则直接用ｔ检验，若不等，可采用ｔ 检验或变量变换或秩和检验等方法。 ２８中国现代医生ＣＨＩＮＡ ＭＯＤＥＲＮ ＤＯＣＴＯＲ