实验十 血糖的测
定之巴公井开创作
创作时间：二零二一年六月三十日 血液中的葡萄糖称血糖.正凡人血糖浓度较恒定, 维持在3．9mmol／L～6．1mmol／L之间.血糖浓度的相对恒定是机体进行正常生理活动的前提条件之一, 有着双重实际意义：其一, 维持稳定的能源供给, 满足机体在各种生理状态下对能量的需求.其二, 保证机体不因进食致血糖浓渡过高, 招致糖的丧失.
因此, 血糖的测定是临床生化检验实验室的惯例检测项目.血糖测定按其发展过程及反应原理的分歧, 年夜致分三类：氧化还原法 , 缩合法（主要有邻甲苯胺法）, 酶法（主要有己糖激酶法和葡萄糖氧化酶法）.下边介绍两种方法供选择.
一、葡萄糖氧化酶法
【目的】
1. 了解葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理, 能进行血糖测定的把持.
2. 掌握血糖测定的临床意义. 【原理】
创作时间：二零二一年六月三十日
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葡萄糖氧化酶 (glucose oxidase, GOD) 能将葡萄糖氧化为葡萄糖酸和过氧化氢.后者在过氧化物酶 (peroxidase, POD)作用下, 分解为水和氧的同时将无色的4-氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的醌类化合物, 即 Trinder 反应.其颜色的深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比, 在505nm波长处测定吸光度, 与标准管比力可计算出血糖的浓度.反应式如下：
【器材】
试管、吸管、试管架、恒温水浴箱、分光光度计 【试剂】
1. 0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0）
称取无水磷酸氢二钠8.67g及无水磷酸二氢钾5.3g溶于800ml蒸馏水中, 用1mol/L氢氧化钠（或1mol/L盐酸）调节pH至7.0, 然后用蒸馏水稀释至1L.
2. 酶试剂
称取过氧化物酶1200U, 葡萄糖氧化酶1200U, 4-氨基安替比林10mg, 叠氮钠100mg, 溶于上述磷酸盐缓冲液80ml中, 用1mol/L NaOH调pH至7.0, 加磷酸缓冲液至100ml.置冰箱保管, 4℃可稳定3个月. 3. 酚溶液
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称取重蒸馏酚100mg溶于100ml蒸馏水中（酚在空气中易氧化成红色, 可先配成500g/L的溶液, 贮存于棕色瓶中, 用时稀释）, 用棕色瓶贮存. 4. 酶酚混合试剂
取上述酶试剂与酚溶液等量混合, 4℃可以寄存一个月.
5. 12mmol/L苯甲酸溶液
溶解苯甲酸1.4g于蒸馏水约800ml中, 加温助溶, 冷却后加蒸馏水至1L.
6．葡萄糖标准贮存液（100mmol/L）
称取已干燥恒重的无水葡萄糖1.802g, 溶于12mmol/L苯甲酸溶液约70ml中, 并移入100ml容量瓶内, 再以12mmol/L苯甲酸溶液加至100ml.
7.葡萄糖标准应用液（5mmol/L）
吸取葡萄糖标准贮存液5.0ml 于100ml 容量瓶中, 加12mmol/L 苯甲酸溶液至刻度.
【把持】
取3 支试管,编号, 按下表把持.
表3-12 血糖测定把持步伐
加入物 (ml) 血清
空白管 －
标准管 －
测定管
创作时间：二零二一年六月三十日
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葡萄糖标准液 蒸馏水 酶酚混合液
－
－
－ －
混匀, 置 37 ℃水浴中保温 15分钟, 在波长 505nm 处比色, 以空白管调零, 读取标准管及测定管吸光度.
【计算】
测定管吸光度
血糖（mmol/L）= ×5 标准管吸光度
【注意事项】
1．测定结果如超越20mmol／L, 应将标本用生理盐水稀释后再测定, 结果乘以稀释倍数.
2．若酶酚混合试剂呈红色, 应弃之重配.因标本和标准用量少, 其加量是否准确对测定结果影响较年夜, 故其加量必需准确.
3．GOD-POD法的第一步反应特异性高, 而由POD催化的第二步指示反应是非特异性的, 易受标本中尿酸、维生素C、谷胱甘肽、胆红素等还原物的干扰, 这些物质与色素原竞争H202, 使测定结果偏低.
4．Trinder反应由Trinder于1969年提出.后经许多学者改进, 采纳2, 4-二氯酚、2-羟-3, 5-二氯苯磺酸等取代苯酚, 由于这些化合物氧化生成的色素
创作时间：二零二一年六月三十日
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的摩尔吸光系数均高于苯酚, 使反应灵敏度得以提高.
【正常参考范围】
【临床意义】
1. 生理性高血糖 可见于摄入高糖饮食或注射葡萄糖后, 或精神紧张、交感神经兴奋, 肾上腺分泌增加时.
2. 病理性高血糖
⑴糖尿病：病理性高血糖罕见于胰岛素绝对或相对缺乏的糖尿病患者.
⑵对立胰岛素的激素分泌过多：如甲状腺功能亢进、肾上腺皮质功能及髓质功能亢进、腺垂体功能亢进、胰岛α-细胞瘤等.
⑶颅内压增高：颅内压增高（如颅外伤、颅内出血、脑膜炎等）安慰血糖中枢, 呈现高血糖.
⑷脱水引起的高血糖：如呕吐、腹泻和高热等也可使血糖轻度增高.
3. 生理性低血糖 饥饿或剧烈运动、注射胰岛素或口服降血糖药过量. 4. 病理性低血糖
⑴胰岛素分泌过多：由胰岛β细胞增生或胰岛β
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细胞瘤等引起.
⑵对立胰岛素的激素分泌缺乏：如腺垂体功能减退、肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退等.
⑶严重肝病患者：肝贮存糖原及糖异生功能低下, 不能有效调节血糖.
【结果及分析】 【思考题】
1. 血糖有哪些来源和去路, 机体是如何调节血糖浓度恒定的？
2. 酶试剂为什么要用磷酸缓冲液配制, 用蒸馏水是否可以, 为什么？
二、邻甲苯胺法
【目的】
了解测定血糖的原理和方法, 要求在实验中培养学生严谨的作风和准确地进行实际把持的能力.
【原理】
葡萄糖在热的醋酸溶液中与邻甲苯胺缩合生成葡萄糖邻甲苯胺, 后者脱水生成雪夫（Schiff）碱, 再经结构重排, 生成有色化合物.颜色的深浅与葡萄糖含量成正比.其反应式如下：
葡萄糖 + 邻甲苯胺葡萄糖邻甲苯胺
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-H2O
葡萄糖邻甲苯胺雪夫碱 【器材】
试管、吸管、试管架、恒温水浴箱、分光光度计 【试剂】
1．邻甲苯胺试剂
于940ml冰醋酸中加入硫脲1.5g, 邻甲苯胺60ml,混合,直至硫脲完全溶解,置棕色试剂瓶中,室温保管.新配试剂应放置24小时后（待老化）使用.此试剂腐蚀性强, 防止接触皮肤, 应用自动吸管加液.
2．12mmol/L苯甲酸溶液
于900ml 蒸馏水中加入苯甲酸1.4g,加热助溶,冷却后置于1L容量瓶中,加蒸馏水至刻度.
3．葡萄糖标准贮存液（100mmol/L）
称取无水葡萄糖（预先置80℃烤箱干燥至恒重, 移置干燥器内保管）1.802g,溶解于80ml苯甲酸溶液中,移置100ml容量瓶中,再加苯甲酸溶液至刻度.
4．葡萄糖标准应用液（5mmol/L）
取葡萄糖标准储藏液5ml, 置于100ml容量瓶中, 加苯甲酸溶液至刻度.
【把持】
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1．取16×150mm试管3支按下表进行把持：
表3-13 血糖测定把持步伐
试剂（ml） 血清或血浆 葡萄糖标准应用液
蒸馏水 邻甲苯胺试剂
测定管 — —
标准管 — —
空白管 — —
2．将上述各管混匀放入沸水浴中加热12分钟, 取出用自来水冷却5分钟.注意在煮沸时水浴中的水面必需高于试管内的液面.否则则温度不均而影响比色.
3．用波长630nm分光光度计进行比色, 空白管调零点, 读取测定管与标准管吸光度.
4．计算
测定管吸光度
血糖（mmol/L）= ×5 标准管吸光度
5．本测定法空腹血糖正常值为～6.11 mmol/L(70～110mg/dl).
【临床意义】同上. 【结果及分析】 【思考题】
讨论血糖升高和降低的临床意义及其维持恒定的因素？
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