微生物学实验技术考试大纲

一、指导思想

检查学生对微生物学基本实验技术的掌握和运用的熟练程度，督促学生复习和巩固实验技能，为进一步学习专业课和从事微生物科研、教学和生产打下扎实的实验基本功。

二、考试方式

实际操作

三、考试范围

1、 三大类群微生物细菌、放线菌和霉菌的制片观察技术；

2、 微生物细胞的大小测定；

3、 微生物细胞的显微计数。

四、评分批准（附后）

第一题 细菌革兰氏染色 评分标准

类别 1 2 项目 点酒精灯 取载玻片 分值 5 5 标准 取火柴等点燃酒精灯。灯帽倒扣在桌上。 从广口瓶中取出载玻片，盖上瓶盖，烧去片上的酒精。 扣分 灯帽乱扔扣2分，火柴棒乱丢扣2分 不盖瓶盖者扣2分， 在灯上长时间烧片扣2分 3 4 5 加蒸馏水 取菌 涂片 5 10 取一滴蒸馏水滴加在载玻片的。 取量太多者扣1分 一手拿试管，一手拿接种环，拔取棉塞，棉塞放于桌子上者扣5分。接种环不灭菌取菌接种环经火焰灭菌后，伸入管内，冷却者扣5分。接种环灭菌后不冷却直接取菌者取5后，开始取一环菌。塞上棉塞。 分。不在无菌圈内进行操作者扣5分。 将所取菌均匀涂成一薄层后，将接种环根据所涂片质量酌情扣分。接种环不灭菌放入灭菌后放于盒中。 6 7 8 9 10 11 12 13 干燥 固定 初染 媒染 脱色 复染 干燥 镜检 5 5 5 5 5 5 5 10 风干或在酒精灯上方烤干 定3次，每次1-2秒。 加结晶紫覆盖涂片，进行初染1分种，水洗 加碘液媒染1分钟，水洗 用95%的酒精脱色30秒，水洗 用番红复染1分钟，水洗 吸干 视情况酌情扣分 视情况酌情扣分 视情况酌情扣分 上干燥时，离火焰太近者扣2分 视情况酌情扣分 盒中，扣1分。乱扔于桌子上扣1分。 若离酒精灯太近进行干燥者扣2分 将干燥后的载玻片在酒精灯火焰上固若涂片面朝下在酒精灯上进行固定者扣5分。 风干或在酒精灯上方烤干或用吸水纸用吸水纸吸干时若有搓动者，扣2分；在火焰先用低倍镜，后用高倍镜，再加香柏油，拿低倍镜或高倍镜当油镜用时，扣5分，转换用油浸镜观察。也可直接用油镜进行观物镜时，不用转换器者扣2分，调焦时上下移察 动扣5分，压破载玻片者，该项不得分。 不正确者该项不得分 每缺1步扣5分 14 15 结果 显微镜 保养 15 15 正确者得全分 擦去香柏油→沾二甲苯擦→擦去二甲苯（重复3次），加罩衣，登记 →注：每超1分钟扣1分

第二题 霉菌制片观察 评分标准

类别 1 项目 点酒精灯 分值 5 标准 取火柴等点燃酒精灯。灯帽倒扣在桌上。 扣分 灯帽乱扔扣2分，火柴棒乱丢扣2分 2 取载玻片 5 从广口瓶中取出载玻片，盖上瓶盖，烧去片上的酒精。 不盖瓶盖者扣2分， 在灯上长时间烧片扣2分 3 4 加棉兰 取菌 40 在载玻片的滴加一滴棉兰。 平板拿法不规范者扣5分。接种针不灭菌取菌者扣5分。接种针灭菌后不冷却直接取菌者取5一手拿平板，一手拿接种针，接种针经分。不在无菌圈内进行操作者扣5分。取菌不符火焰灭菌后，伸入平板内，冷却后，开合规定者，扣5分。接种针不灭菌放入盒中，扣始取菌。根霉挑取菌丝即可。青霉和曲霉需带一点培养基出来。将接种环灭菌后放于盒中。 3分。乱扔于桌子上扣3分 5 6 7 8 加盖玻片 镜检 结果 显微镜 保养 5 20 15 10 取菌后，用镊子或手取一盖玻片，盖上盖玻片。 用低倍镜或高倍镜观察。 正确者得全分（结合显微镜判断） 加罩衣，登记 盖玻片下有气泡扣1分 转换物镜时，不用转换器者扣2分，调焦时上下移动扣5分，压破载玻片者，该项不得分。 不正确者该项不得分 缺1个特征扣5分。 每缺1步扣5分 注：每超1分钟扣1分

第三题 微生物细胞大小测定 评分标准

类别 1 项目 校正 分值 30 标准 显微镜使用符合标准 低倍镜校正结果正确 高倍镜校正结果正确 扣分 转换物镜时，不用转换器者扣2分，调焦时上下移动扣5分，压破载玻片者，该项不得分。每个校正结果不正确，扣2分 2 3 点酒精灯 取载玻片 5 5 取火柴等点燃酒精灯。灯帽倒扣在桌上。 从广口瓶中取出载玻片，盖上瓶盖，烧去片上的酒精。 灯帽乱扔扣2分，火柴棒乱丢扣2分 不盖瓶盖者扣2分， 在灯上长时间烧片扣2分 4 5 6 7 8 加菌悬液 加盖玻片 镜检 结果 显微镜保养 5 5 30 10 10 操作正确 取菌后，用镊子或手取一盖玻片，盖上盖玻片。 加量过多扣5分， 盖玻片下有气泡扣1分 用低倍镜或高倍镜观察。测量5个菌体 转换物镜时，不用转换器者扣2分，调焦时上下移动扣5分，压破载玻片者，该项不得分。 正确者得全分 加罩衣，登记 不正确者该项不得分 每缺1步扣5分

第四题 血球计数板法显微计数 评分标准

类别 1 项目 镜检 计数板 分值 20 标准 显微镜使用符合标准 扣分 转换物镜时，不用转换器者扣2分，调焦时上下移动扣5分，压破载玻片者，该项不得分。 2 3 加样品 计数 10 30 在计数板上加盖玻片，从其边缘加菌悬液 显微镜使用符合标准 镜检5个中格。计数正确 加量过多扣5分， 转换物镜时，不用转换器者扣2分，调焦时上下移动扣5分，压破载玻片者，该项不得分。镜检格数少1个扣5分，计数不准确 扣5分 4 结果 20 计算正确 1 ml菌悬液含菌数=A*25*20*10000 计算错误扣5分 5 清洗 计数板 10 清洗计数板正确 不清洗不得分 8 显微镜 保养 10 加罩衣，登记 每缺1步扣5分