http://www.solarbio.com超低分子量蛋白质Marker（3.3kD-20.1kD)使用说明货号：PR1300规格：15T(150µ1)保存：-20℃保存，有效期为一年。产品简介::超低分子量蛋白质Marker（3.3kD-20.1kD)3种多肽和2种低分子量蛋白质组成，分子量范围为3.3kD-20.1kD。可以用来判断SDS-PAGE上多肽和小蛋白的分子量。本品为蛋白质和多肽混合物的冻干粉，每种蛋白含量约为15-22.5ug，配有一支1×上样缓冲液。使用说明::1.开封后，溶于150µ11×上样缓冲液，于95℃水浴5分钟，可根据需要进行小量分装，每管10µl，-20℃贮存，每次取一管使用，避免反复冻融。2.使用前取分装后的小管室温融化后，95℃预热5分钟即可上样电泳，用考马斯亮蓝G-250染色后可见5条蛋白带(见下示意图)。凝胶的配置方法:http://www.solarbio.com分离胶20%/4.5ml49.5%T3%C49.5%T6%C凝胶缓冲液甘油ddH2O10%APSTEMED/1.82ml1.50ml0.48ml0.70ml40µl5µl16.5%/4.5ml/1.50ml1.50ml0.48ml1.02ml40µl5µl15.5%/4.5ml/1.395ml1.50ml0.48ml1.125ml40µl5µl夹层胶10%/2ml0.407ml/0.667ml/0.926ml20µ|3µl浓缩胶4%/2ml0.160ml/0.496ml/1.344ml20µ|3µl凝胶制备及染色注意事项:1.先配制分离胶，聚合后再配制夹层胶，最后配制浓缩胶，3种胶的制胶体积比为4:1.5:1。电泳时，30v跑1-2小时后，待指示前沿到达分离胶上沿时，把电压调至100v，至电泳结束，整个电泳过程大约需要6-8小时。2.由于多肽所含的氨基酸数目较少，因此如该多肽含有过多的极性氨基酸(碱性或酸性)，则会影响其在SDS-PAGE图上的条带迁移率，即其表观分子量可能和多肽的氨基酸理论推算分子量有一定距离。3.由于SDS-PAGE的图谱上，蛋白质对数分子量和迁移率成正比直线关系的分子量范围为15,000-200,000，因此对于分子量小于10000的蛋白质或多肽的分子量，只能根据标准分子量进行估计，推断其是否落入预测的分子量范围。4.由于超低分子量多肽（3000及3000以下），极易从凝胶上浸出，因此染色及脱色时间不宜太长，脱色后凝胶也不宜在水中浸泡保存过久，否则条带会消失。5.电泳之后可将胶置于固定液中固定20分钟，再进行染色，能得到较好的蛋白条带；如时间不允许，也可不进行固定直接染色。如果使用配方7进行染色时效果不好或考虑其http://www.solarbio.com毒性。相关试剂：P10154×蛋白上样缓冲液（含DTT）A103010%过硫酸氨T10705×Tris-甘氨酸电泳缓冲液P1300-500考马斯亮蓝快速染色附:小分子蛋白质SDS-PAGE电泳试剂配制1.49.5%T3%C(配制夹层胶和浓缩胶)丙烯酰胺48g甲叉双丙烯酰胺1.5g用ddH20溶解后定容至100ml2.49.5%T6%C(配制分离胶)丙烯酰胺46.5g甲叉双丙烯酰胺3.0g用ddH20溶解后定容至100ml3.凝胶缓冲液Tris碱182ghttp://www.solarbio.comddH20300ml用HCl调节pH值至8.45用ddH20定容至500ml再加入SDS1.5g4.10×阳极缓冲液(下槽缓冲液〕Tris碱121.1gddH20400ml用HCl调pH值至8.9用ddH20定容至500ml5.阴极缓冲液(上槽缓冲液)Tris碱12.11gTricine17.92gSDS1g用ddH20定容至1000ml此溶液不用调节pH值6.固定液0.5%戊二醛http://www.solarbio.com30%乙醇用ddH20定容至100ml7.染色液50%甲醇10%乙酸0.2%考马斯亮蓝G-250用ddH20定容至500ml
