多效生长因子对基质金属蛋白酶3,10的负调控作用

维普资讯 http://www.cqvip.com ２８　生　物　技　术　通　讯　ＬＥＴＦＥＲＳ　ＩＮ　ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ　Ｖｏ１．１９　Ｎｏ．１　Ｊａｎ．，２００８　文章编号：１００９—０００２（２００８）０１－００２８—０３　研究报告　多效生长因子对基质金属蛋白酶３，１Ｏ的负调控作用　张博ｌａ，ｌｂ，胡迎春ｈ，杨柳　，李刚ｈ，李晓兵　，吴德昌ｈ，霍艳英　Ｉ、军事医学科学院ａ．放射与辐射医学研究所，北京１００８５０；ｂ．附属医院，北京１０００７１：　２．重庆医科大学病理学教研室，重庆４０００１６　［摘要］　目的：研究多效生长因子对基质金属蛋白酶（ＭＭＰ）３、１０的负调控作用。方法：用ＲＴ—ＰＣＲ、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹比较对照　与多效生长因子沉默细胞中ＭＭＰ３、ＭＭＰ１０的表达；在多效生长因子沉默细胞培养液中加入５０　ｎｇ／ｍＬ多效生长因子，检测　ＭＭＰ３、ＭＭＰ１０的表达。结果：多效生长因子缺失细胞中ＭＭＰ３、ＭＭＰ１０高表达；而在其中添加多效生长因子之后，ＭＭＰ３、　ＭＭＰ１０的表达基本被完全抑制。结论：多效生长因子对ＭＭＰ３、ＭＭＰ１０有负调控作用。　［关键词］　多效生长因子；基质金属蛋白酶；负调控　［中图分类号］Ｑ７５　［文献标识码］Ａ　Ｐｌｅｉｏｔｒｏｐｈｉｎ　Ｎｅｇａｔｉｖｅ　Ｒｅｇｕｌａｔｅ　ｔｈｅ　Ｍａｔｒｉｘ　Ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ　３　ａｎｄ　１０　ＺＨＡＮＧ　Ｂｏ　ＨＵ　Ｙｉｎｇ－Ｃｈｕｎ　ＹＡＮＧ　Ｌｉｕ２　ＬＩ　Ｇ硎　ＬＩ　Ｘｉａｏ－Ｂｉｎｇａ　ｂ．　Ｄｅ－Ｃｈａｎｇ１％ＨＵＯ　Ｙａｎ－Ｙｉｎｇａ　１．　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｒａｄｉａｔｉｏｎ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　１００８５０；ｂ．Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　１０００７　１；Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｍｉｌｉｔａｒｙ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ　４０００１６；Ｃｈｉｎａ　［Ａｂｓｔｒａｃｔ］０ｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍａｔｒｉｘ　ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ（ＭＭＰ）３，１０　ｂｙ　ｐｌｅｉｏｔｒｏｐｈｉｎ　（ＰＴＮ）．　Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ　ｍＲＮＡ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ＭＭＰ３，　ＭＭＰ１０　ｗｅｒｅ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ａｎｄ　ＰＴＮ　ｋｎｏｃｋｉｎｇ　ｄｏｗｎ　ＭＥＦ　ｃｅｌｌｓ　ｂｙ　ＲＴ—ＰＣＲ　ａｎｄ　Ｎｏｒｔｈｅｒｎ　Ｂｌｏｔ．Ｔｈｅｎ．５０　ｎｇ／ｍＬ　ＰＴＮ　ｗａｓ　ａｄｄｅｄ　ｉｎ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＰＴＮ　ｋｎｏｃｋ—　ｉｎｇ　ｄｏｗｎ　ＭＥＦ　ｃｅｌｌｓ　ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｐｌｅｉｏｔｒｏｐｈｉｎ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｏｆ　ＭＭＰ３，　ＭＭＰ１０．　Ｒｅｓｕｌｔｓ：　ＭＭＰ３，　ＭＭＰ１０　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｈｉｇｈｅｒ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃｅｌｌ　ｔｈａｔ　ＰＴＮ　ｗａｓ　ａｂｓｅｎｃｅ．ｂｕｔ　ｔｈｅｙ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｌｏｗｅｒ　ａｆｔｅｒ　ｔｈｅ　ＰＴＮ　ｅｆｆｅｅｔｅｄ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：　ＰＴＮ　ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｒｅｇｕｌａｔｅｄ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＭＭＰ３　ａｎｄ　ＭＭＰ１０．　［Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ］ｐｌｅｉｏｔｒｏｐｈｉｎ；ｍａｔｉｒｘ　ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ；ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　多效生长因子（ｐｌｅｉｏｔｒｏｐｈｉｎ，ＰＴＮ）是一种与肝素结合生长因　子具有高度同源性的分泌性生长因子，在细胞生长、分化和发育　过程中都具有非常重要的作用。已有研究表明　Ｎ具有促进血　管生成、刺激神经突触生长、诱导细胞迁移及促进细胞有丝分裂　等作用…。基质金属蛋白酶（ｍａｔｉｒｘ　ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ，ＭＭＰ）是高　干扰技术建立的ＰＴＮ稳定沉默的细胞系［５１。ＴＲＩｚｏｌ试剂（Ｉｎｖｉ￣ｏ—　ｇｅｎ公司）；反转录试剂盒（Ｐｒｏｍｅｇａ公司）；　回收试剂盒（天根公司）。　聚合酶，ＰＣＲ凝胶　１．２细胞培养　将指数期生长的Ｐｔｅｎ—ＭＥ１７２４１、ＰＴＮ—ｓｉＲＮＡ　Ｂ细胞以１．５ｘ　度保守的依赖于锌离子的内切蛋白水解酶家族，ＭＭＰ３、ＭＭＰ１０　为基质溶解素亚家族成员，其主要作用就是降解细胞外基质　（ＥＣＭ），其中ＭＭＰ３在肿瘤的浸润转移中具有重要作用　。在本　研究中，我们通过ＲＴ—ＰＣＲ及Ｎｏｔｒｈｅｎ印迹等方法，试图揭示　ｒＮ对ＭＭＰ３、ＭＭＰ１０的负调控作用。　１０　接种于１０　ｃｍ平皿中，在含１０％胎牛血清和１％青链霉素的　ＤＭＥＭ培养液中，于３７ｏＣ、５％Ｃ０２孵箱中培养。待细胞长到８０％　时，提取细胞总ＲＮＡ。另取处于指数生长期的ＰＴＮ—ｓｉＲＮＡ　Ｂ细　胞，在其培养液中加入ＰＴＮ，至终浓度为５０　ｎｇ／ｍＬ，继续培养，　分别收集培养１、２　ｈ的细胞，提取ＲＮＡ。　１．３　ＲＮＡ提取　１材料和方法　１．１　材料　吸弃培养液，在３５　ｍｍ细胞培养皿中加入１　ｍＬ　ＴＲＩｚｏｌ试　剂裂解细胞，收集于１．５　ｍＬ离心管中，加入２００　Ｌ氯仿，剧烈　振摇１５　Ｓ，室温静置３　ｍｉｎ，４￣Ｃ、１２　０００　ｒ／ｍｉｎ离心１５　ｍｉｎ，收　Ｐｔｅｎ　ＭＥＦ２４１细胞由本实验室自建。将永生化Ｐｔｅｎｋ，，￣小　鼠胚胎成纤维细胞　经体外条件敲除Ｐｔｅｎ基因后得到的细胞克　隆接种裸鼠，然后从成瘤裸鼠肿瘤中分离得到的单克隆细胞即　集上清，加入０．５　ｍＬ异丙醇，室温沉淀１０　ｍｉｎ．４￣Ｃ、１２　０００　ｒ／　为Ｐｔｅｎ　ＭＥＦ２４１细胞，该细胞中　ｎ基因表达水平较高【圳。ＰＴＮ—　ｓｉＲＮＡ　Ｂ细胞为本实验室以Ｐｔｅｎ　ＭＥＦ２４１细胞为基础，用ＲＮＡ　［收稿日期］２００７—０４－０３　［基金项目］国家自然科学基金项目（３０４７１９４６）；　北京市自然科学基金项目（７０５２０５６和５０６２０３６）　［作者简介］张博（１９７７－），男。医师　［通讯作者］霍艳英。（Ｅ－ｍｍ１）ｈｕｏｙｙ＠ｎｉｃ．ｂｍｉ．ａｃ．ｃｎ　维普资讯 http://www.cqvip.com

张博等：多效生长因子对基质金属蛋白酶３，１０的负调控作用　ｍｉｎ离心１０　ｍｉｎ，吸弃上清，加入１　ｍＬ　７５％乙醇洗涤，７　５００　ｒ／　ｍｉｎ离心５　ｍｉｎ，晾干，用ＤＥＰＣ水溶解后用ＧｅｎｅＱｕａｎｔ紫外分光　光度仪定量，一７０℃保存。　１．４　ＲＴ－ＰＣＲ检测　用自Ｐｔｅｎ—ＭＥＦ２４１、ＰＴＮ－ｓｉＲＮＡ　Ｂ细胞提取的总ＲＮＡ进　行逆转录及ＰＣＲ扩增。　逆转录体系：将２　ｇ　ＲＮＡ与１　Ｌ　ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）混匀，７０。Ｃ加　热５　ｒａｉｎ，立即冰浴，冷却后短暂离心使样品集中于管底，再加入　５　Ｌ　５　ｘＭＭＬＶ缓冲液、１　Ｌ　ｄＮＴＰｓ（１０　ｍｍｏｌ／Ｌ）、１　Ｌ　ＲＮａｓｉｎ、１　Ｌ　ＭＭＬＶ，用无ＲＮＡ酶的水将体系补足至２５　Ｌ，混　匀后３７。Ｃ孵育６０　ｍｉｎ。　ＰＣＲ反应体系：５　Ｌ　１０ｘＰＣＲ缓冲液，４　Ｌ　ｄＮＴＰｓ（２．５　ｍｍｏｌ／Ｌ），上下游引物各０．５　Ｌ，模板ＤＮＡ　２　Ｌ，Ｔａｑ酶０．２５　Ｌ，灭菌水补足５０　Ｌ。　ＰＣＲ反应条件：首先９４℃５　ｍｉｎ，然后以９４℃３０　ｓ　ｘ５９℃　３０　ｓ、７２℃１０　ｍｉｎ进行３５个循环，最后７２℃１０　ｍｉｎ。　所用引物序列如下：　ＭＭＰ３　上游引物：５＂－ＣＡＴＧＧＡＴＧＣＴＧＣＡＴＡＴＧＡＧＧＴ一３　，　下游引物：５＂－ＣＡＴＣＣＡＣＣＣ１ＴＩ℃ＡＧＴＣＡＡＣＡＣ一３　：　ＭＭＰ１０　上游引物：５＂－ＣＧＡＧＧＡＡＡＴＧＡＡＧＴＣＣＡＡＧＣＡ一３　，　下游引物：５＂－ＣＡＧＣＣＡＧＣＴＧＴＴＧＣＴＣＴＴＣＡＧ一３　。　将ＰＣＲ产物行２０　ｇ／Ｌ琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色，凝　胶成像仪拍照。　１．５　Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹　各取１５　ｇ自Ｐｔｅｎ—ＭＥＦ２４１、Ｐ１１Ｎ—ｓｉＲＮＡ　Ｂ细胞提取的总　ＲＮＡ进行甲醛变性胶电泳，然后通过毛细管转移法将变性胶上　的ＲＮＡ转移到尼龙膜上。用Ｐｒｉｍｅ—ｏｆ．一Ｇｅｎｅ标记试剂盒　（Ｐｒｏｍｅｇａ公司）标记ｏｔ－３２ｐ　ｄＣＴＰ于各基因的ｃＤＮＡ片段作为探　针，杂交在Ｅｘｐｒｅｓｓ　Ｈｙｂ杂交液（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ公司）中于６２℃进行，　杂交结束后洗膜，然后置杂交膜于暗盒中，ＲＮＡ与探针结合面上　放置Ｘ线胶片，压片，一７０。Ｃ放射自显影４８　ｈ，经显影、定影后分　析杂交信号；以同一张膜上的看家基因ＧＡＰＤＨ探针的杂交信号　为对照。　２结果　２．１　ＰＴＮ缺失的细胞中ＭＭＰ３、ＭＭＰ１０的表达上调　图１为对照Ｐｔｅｎ　ＭＥＦ２４１细胞及ＰＴＮ稳定沉默的ＰＴＮ—　Ｐｔｅｒｒ＇一ＭＥＦ２４１　ＰＩＮ—ｓｊＲＮＡＢ　ＭＭＰ３　ＭＭＰ１０　１８Ｓ　图Ｉ　ＰＴＮ沉默后细胞内ＭＭＰ３、ＭＭＰ１０表达水平的ＲＴ－ＰＣＲ　２９　ｓｉＲＮＡ　Ｂ细胞ＲＴ—ＰＣＲ检测结果，图２为相应的Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹　结果。结果表明，ＰＴＮ稳定沉默后细胞中ＭＭＰ３、ＭＭＰ１０的　ｍＲＮＡ表达水平显著增高。　２．２　ＰＴＮ对ＭＭＰ３、ＭＭＰ１０表达的抑制作用　图３为５０　ｎｇ／ｍＬ的外源性ＰＴＮ分别作用Ｐ１１Ｎ沉默的　ＰＴＮ—ｓｉＲＮＡ　Ｂ细胞ｌ和２　ｈ后细胞内ＭＭＰ３、ＭＭＰｌ０的表达水　平。结果表明，Ｐ１１Ｎ几乎可以完全抑制ＭＭＰ３、ＭＭＰ１０的表达。　Ｐｔｅｒｒ￣－ＭＥＦ２４１　ＰＴＮ—ｓｉＲＮＡ　Ｂ　ＭＭＰ３　ＭＭＰ１０　ＧＡＰＤＨ　图２　ＰＴＮ沉默后ＭＭＰ３、ＭＭＰ１０表达水平的Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹　５０　ｎｇ／ｍＬＰＴＮ作用时闻，ｈ　０　１　２　ＭＭＰ３　ＭＭＰ１０　ＧＡＰＤＨ　图３外源性ＰＴＮ对ＰＴＮ—ｓｉＲＮＡ　Ｂ细胞表达ＭＭＰ３、ＭＭＰＩＯ的　抑制作用的Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹　３讨论　ＭＭＰ是通过参与细胞表面和细胞外基质蛋白的降解或激活　过程来调控细胞与细胞之间、细胞与细胞外基质之间的相互作　用的，是正常细胞与肿瘤细胞微环境的重要调节者。在正常组织　中ＭＭＰ表达量极低，而在炎症细胞因子、激素、生长因子刺激下　和细胞转化过程中其表达上升，许多生理及病理过程，如炎症、　组织纤维化、新血管形成和肿瘤侵袭转移等都与ＭＭＰ的表达及　活化有关。Ｇｅｒｇｅｒ通过对５００例乳腺癌患者与５００例健康对照人　群使用多基因分析，发现包括ＭＭＰ３在内的３种基因表型对乳　腺癌的遗传学分类发挥重要作用，表明患乳腺癌的危险性与　ＭＭＰ３基因有一定关系ｆ６ｉ。　ＭＭＰ表达和发挥作用的各个环节均受到严格调控，其中在　基因转录、酶原激活和酶活性抑制水平的调控尤为重要。整合　素、ＥＣＭ蛋白、细胞形状的改变及细胞因子、癌基因产物和细胞　外基质金属蛋白酶诱导因子（ＥＭＭＰＲＩＮ）等均可参与对ＭＭＰ表　达水平的调节。Ｈｏｕ等研究发现，缺氧可以介导Ｂｃｌ一２的表达，　Ｂｃｌ一２与ｃ—ｍｙｃ结合使ＭＭＰ２表达增强　。Ｉｔｏ等将人类乳腺癌　ＭＣＦ一７细胞和人类真皮成纤维细胞共同培养，提高了成纤维细　胞中ＭＭＰ３前体物水平，表明培养状态的乳腺癌ＭＣＦ一７细胞产　生了可溶性及能与细胞膜相结合的因子，这个因子刺激了相邻　的间质细胞产生ＭＭＷ］。Ｋｒｅｊｃｉ等也发现，小鼠软骨发育不全疾　病中，成纤维细胞生长因子和Ｃ一促尿钠排泄肽可以使ＭＭＰ１、２、　维普资讯 http://www.cqvip.com ３０　３、９、１０、１３的活性得到释放　。研究还发现，在效应Ｔ淋巴细胞　中，内皮细胞源性ｗｎｔ可以使ＭＭＰ２、９的表达增强，从而促进Ｔ　细胞的迁移【１Ｏｌ。　ＰＴＮ作为跨膜酪氨酸磷酸酶的配体，参与酪氨酸磷酸酶下　游的多种信号因子的转导；ＰＴＮ是ＲＰＴＰ１３／￣的天然配体，与　ＲＰＴＰ１３／￣结合后，能使其催化活性丧失，显著降低其对Ｂ一联蛋　白（ｃａｔｅｎｉｎ）的去磷酸化作用，导致１３一联蛋白的磷酸化水平增加，　从而破坏１３一联蛋白与钙黏蛋白的相互作用，使正常细胞间黏附　破坏，细胞极性及组织结构也相应破坏，易形成肿瘤，并使肿瘤　易转移…】。ＰＴＮ与ＡＬＫ结合后能活化下游的ＭＡＰＫｔ　和ＰＩ３Ｋ通　路【１３１；与硫酸肝素蛋白多糖结合能活化下游的Ｓｒｃ激酶通路㈣；还　能影响核转录因子ＮＦ—ＫＢ等的活性【１５１，从而调节多种靶基因的　表达。　本实验室的前期研究发现，　Ｎ在Ｐｔｅｎ缺失的细胞中表达　上调，进一步用ＲＮＡ干扰的手段使ＰＴＮ表达沉默后，发现细胞　的增殖能力及其在裸鼠中的成瘤能力显著减弱。本研究表明，　ＰＴＮ沉默细胞ＭＭＰ３、ＭＭＰ１０表达显著上调，而外源性ＰＴＮ可　使ＭＭＰ３、ＭＭＰ１０的表达显著受抑，从正反两方面证明了　ＭＭＰ３、ＭＭＰ１０受ＰＴＮ负调控，这一发现在国内外尚属首次。但　对于ＰＴＮ如何调控ＭＭＰ的表达、这一调控过程在生理及病理情　况下的生物学意义及其同肿瘤发生发展的关系等还需要进一步　的研究。　参考文献　Ｄｅｕｅｌ　Ｔ　Ｆ，Ｚｈａｎｇ　Ｎ，Ｙｅｈ　Ｈ　Ｊ，ｅｔ　ｏ１．Ｐｌｅｉｏｔｏｒｐｈｉｎ：ａ　ｃｙｔｏｋｉｎｅ　ｗｉｔｈ　ｄｉｖｅｒｓｅ　ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ　ａｎｄ　ａ　ｎｏｖｅｌ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　ｐａｔｈｗａｙ　ｆＪ］．Ａｒｃｈ　Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｂｉｏｐｈｙｓ，２００２，３９７（２）：１６２—１７１．　金霞，张健慧．基质金属蛋白酶基因多态性的研究进展【Ｊ］．国外医　学・遗传学分册，２００５，２８（２）：７６－７９　Ｌｉ　Ｇ，Ｒｏｂｉｎｓｏｎ　Ｇ　Ｗ，Ｌｅｓｃｈｅ　Ｒ，ｅｔ　ｏ１．Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌ　ｌｏｓｓ　ｏｆ　ＰＴＥＮ　ｌｅａｄｓ　ｔｏ　ｐｒｅｃｏｃｉｏｕｓ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ａｎｄ　ｎｅｏｐｌａｓｉａ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｍａｍｍａｒｙ　ｇｌａｎｄ［Ｊ］．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，２００２，１２９（１７）：４１５９—４９７０．　Ｕ　Ｇ，Ｈｕ　Ｙ，Ｈｕｏ　Ｙ，ｅｔ　ｏ１．ＰＴＥＮ　ｄｅｌｅｔｉｏｎ　ｌｅａｄｓ　ｔｏ　ｕｐ—ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｓｅｃｒｅｔｅｄ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ　ｐｌｅｉｏｔｏｒｐｈｉｎ［Ｊ］．Ｊ　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ．２００６，２８１　生　物　技　术　通　１　讯　２　３　４　ＬＥＴＦＥＲＳ　ＩＮ　ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＩ　ＯＧＹ　Ｖｏ１．１　９　Ｎｏ．１　Ｊａｎ．，２００８　（１６）：１０６６３—１０６６８．　［５】胡迎春，刘敏丽，霍艳英，等．ｓｉＲＮＡ沉默多效生长因子表达及其　生物学意义【Ｊ］．癌症，２００６，２５（１０）：１２１０—１２１５．　［６】　Ｇｅｒｇｅｒ　Ａ，Ｌａｎｇｓｅｎｌｅｈｎｅｒ　Ｕ，Ｒｅｎｎｅｒ　Ｗ，ｅｔ　ｏ１．Ａ　ｍｕｈｉｇｅｎｉｃ　ａｐ—　ｐｒｏａｃｈ　ｔｏ　ｐｒｅｄｉｃｔ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｒｉｓｋ【Ｊ］．Ｂｒｅａｓｔ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ　Ｔｒｅａｔ，　２００７，１０４（２）：ｌ５９－１６４．　［７】Ｈｏｕ　Ｙ　Ｚ，Ｏｋａｍｏｔｏ　Ｃ，Ｏｋａｄａ　Ｋ，ｅｔ　ｏ１．Ｃ—Ｍｙｃ　ｉｓ　ｅｓｓｅｎｔｉａｌ　ｆｏｒ　ｕｒｏｋｉｎａｓｅ　ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ　ａｃｔｉｖａｔｏｒ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｎ　ｈｙｐｏｘｉａｉｎｄｕｃｅｄ．ｖａｓｃｕ—　ｌａｒ　ｓｍｏｏｔｈ　ｍｕｓｃｌｅ　ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００７，３：１—３０．　［８】Ｉｔｏ　Ａ，Ｎａｋａｊｉｍａ　Ｓ，Ｓａｓａｇｕｒｉ　Ｙ，ｅｔ　ｏ１．Ｃｏ—ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｂｒｅａｓｔ　ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ　ＭＣＦ——７　ｃｅｌｌｓ　ａｎｄ　ｈｕｍａｎ　ｄｅｒｍａｌ　ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ　ｅｎ．．　ｈａｎｃｅｓ　ｔｈｅ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍａｔｉｒｘ　ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ　１，２　ａｎｄ　３　ｉｎ　ｆｉ—　ｂｒｏｂｌａｓｔｓ［Ｊ］．Ｂｒ　Ｊ　Ｃａｎｃｅｒ，１９９５，７ｌ（５）：１０３９—１０４５．　［９】Ｋｒｅｊｃｉ　Ｐ，Ｍａｓｒｉ　Ｂ，Ｆｏｎｔａｉｎｅ　Ｖ，ｅｔ以Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ　ａｎｄ　Ｃ——ｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃ　ｐｅｐｔｉｄｅ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　ｉｎ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｈｏｎｄｒｏ・－　ｃｙｔｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ　ｍａｔｉｒｘ　ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｃｅｌｌ　Ｓｃｉ，　２００５．１ｌ８（Ｐｔ　２１）：５０８９－５１００．　［１０】Ｗｕ　Ｂ，Ｃｒａｍｐｔｏｎ　Ｓ　Ｐ，Ｈｕｇｈｅｓ　Ｃ　Ｃ．Ｗｎｔ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　ｉｎｄｕｃｅｓ　ｍａｔｉｒｘ　ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎｄ　ｒｅｇｕｌａｔｅｓ　Ｔ　ｃｅｌｌ　ｔｒａｎｓｍｉｒｇａｔｉｏｎ【Ｊ］．　Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，２００７，２６（２）：２２７—２３９．　［１ｌ】Ｂｅｈｒａｎ　Ｐ　Ｊ，Ｂｉｘｂｙ　Ｊ　Ｌ．Ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｔｙｒｏｓｉｎｅ　ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅｓ　ａｓ　ｍｅｄｉａｔｏｒｓ　ｏｆ　ｃｅｌｌｕｌａｒ　ａｄｈｅｓｉｏｎ［Ｊ］．Ｆｒｏｎｔ　Ｂｉｏｓｃｉ．２００３．１（８）：８７—９９．　［１２】Ｍａｃｅｙ　Ｔ　Ａ，Ｌｏｗｅ　Ｊ　Ｄ，Ｃｈａｖｋｉｎ　Ｃ．Ｍｕ　ｏｐｉｏｉｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＥＲＫＩ／２　ｉｓ　ＧＲＫ３　ａｎｄ　ａｒｒｅｓｔｉｎ　ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｉｎ　ｓｔｒｉａｔａｌ　ｎｅｕｒｏｎｓ　ｆＪ］．　Ｊ　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ，２００６，２８　ｌ（４５）：３４５　ｌ　５－３４５２４．　［１３】Ｓｅｏ　Ｊ　Ｈ，Ａｈｎ　Ｙ，Ｌｅｅ　Ｓ　Ｒ，ｅｔ　ｏ１．Ｔｈｅ　ｍａｊｏｒ　ｔａｒｇｅｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｎｄｏｇｅ—　ｎｏｕｓｌｙ　ｇｅｎｅｒａｔｅｄ　ｒｅａｃｔｉｖｅ　ｏｘｙｇｅｎ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｉｎ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｔｏ　ｉｎｓｕｌｉｎ　ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ　ｉｓ　ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ　ａｎｄ　ｔｅｎｓｉｎ　ｈｏｍｏｌｏｇ　ａｎｄ　ｎｏｔ　ｐｈｏｓｐｈｏ—　ｉｎｏｓｉｔｉｄｅ一３　ｋｉｎａｓｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ＰＩ一３　ｋｉｎａｓｅ／Ａｋｔ　ｐａｔｈｗａｙ【Ｊ］．　Ｍｏｌ　Ｂｉｏｌ　Ｃｅｌ１．２０ｏ５．１６：３４８－３５７．　［１４】Ｒａｕｖａｌａ　Ｈ，Ｈｕｔｔｕｎｅｎ　Ｈ　Ｊ，Ｆａｇｅｓ　Ｃ，ｅｔ　ｏ１．Ｈｅｐａｒｉｎ—ｂｉｎｄｉｎｇ　ｐｒｏ—　ｔｅｉｎｓ　ＨＢ－ＧＡＭ（ｐｌｅｉｏｔｏｒｐｈｉｎ）ａｎｄ　ａｍｐｈｏｔｅｒｉｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｅｌｌ　ｍｏｔｉｌｉｔｙ［Ｊ］．Ｍａｔｒｉｘ　Ｂｉｏｌ，２０００，１９（５）：３７７—３８７．　［１５】Ｂｈａｔ—Ｎａｋｓｈａｔｒｉ　Ｐ，Ｎｅｗｔｏｎ　Ｔ　Ｒ，Ｇｏｕｌｅｔ　Ｒ，ｅｔ　ｏ１．ＮＦ—ｋａｐｐａ　Ｂ　ａｃｔｉ—　ｖａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ　６　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ　ｂｙ　ｅｓｔｒｏｇｅｎ　ｒｅ—　ｃｅｐｔｏｒ－ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｌ—ｄｅｒｉｖｅｄ　ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ　Ｉａｌｐｈａ【Ｊ］．　Ｍｅｄ　Ｓｃｉ．１９９８．９５：６９７１—６９７６．