ChinaFood Additives 试验研究 中国食品添加剂 母乳中乳铁蛋白含量及影响因素研究 刘彦品,董学艳,姜铁民,李贞,陈历俊 (国家母婴乳品健康工程技术研究中心,北京三元食品股份有限公司北京市乳品工程技术研究中心; 北京摘法果要:目的100163) 了解母乳乳铁蛋白在不同泌乳阶段(乳母分娩后0~5 d、12~14 d、1 m、3 m、4 m) 的变化趋势,以及不同分娩方式、BMI、婴儿性别、乳母年龄和孕期健康状况等因素对其含量的影响。方 利用双抗体夹心ELISA法,对0~5 d、12~14 d、1 m、3 m、4m时的母乳乳铁蛋白含量进行测定。结 从0~5 d到3 m乳铁蛋白含量呈下降趋势,由2.45 m咖L逐渐降低至2.20mpJn ̄,但无显著性差异 (P>0.05),直到4 m时显著降低至1.02 m ̄'mL(P<0.05)。阴道分娩和剖宫产两组母乳中乳铁蛋白含量在 0~5 d、1 m、3 m和4 m时无显著性差异(P>0.05),12-14 d时剖官产组母乳中乳铁蛋白含量显著高于阴 道分娩组(P<0.05)。孕前、产前和产后不同BMI(≤l8,l8~25和≥25),不同婴儿性别、不同年龄和不 同孕期健康状况的乳母母乳中乳铁蛋白含量均无显著差异(P<0.05)。结论和成熟乳中的含量呈下降趋势,不同泌乳阶段和分娩方式影响乳铁蛋白含量。 关键词:乳铁蛋白;泌乳阶段,分娩方式;BMI;婴儿性别,产妇年龄;孕期疾病 中图分类号:R151.3 文献标识码:A 文章编号:1006—2513(2018)08—0070—05 母乳乳铁蛋白在初乳、过渡乳 Lactoferrin COnCentratiOnin in hUman milk and its affection factors LIU Yan-pin,DONG Xue-yan,JIANG Tie-min,LI Zhen,CHEN Li-jun’ Abstract:Objective:To explore the changes oflactoferrin in different lactation stages(0~5 d,12~14 d,1 m, 3 m,4 m after baby de,very),and the effects offactors such as mode ofdelivery,BMI,the sex ofthe baby,age of maternal age,pregnancy health status and SO on.Methods:The concentrations oflactoferrin in breast miIk at 0—5 d, 1 2~14 d,1 m,3 m,4 m were determined by double antibody sandwich ELISA.Results:the lactoferrin concentrations decreased from 2.45 mg/mL tO 2.20 mg/mL at 0-5 days to 3 months without significant difference(P >0.05);while it decreased sharply to 1.02 mg/mL(P<0.05)at het 4th month.The concentrations of lactoferrin in diferent lacattion stages(0~5 d,1 m,3 m and 4 m)were not affected by the way of baby delivery(P> 0.05),but he tconcentrations of lactoferrin of cesarean section group were higher han tspontaneous labor roup gat 4 month(P<0.05).The concen ̄aitons of lactoferrin in breast milk were not ffaected by he tfollowing factors such as BMI differences during pregnancy,prenatal,and post ̄}artum(≤18,18~25, >25),the sex ofthe baby (P>0.05),maternal age and healh tcondiiton(P<O.05).Conclusion:The concentrations ofhuman lactoferrin decreased from colostrum milk to transitional milk to mature milk.It was affected by diferent lactation stages and he tway of baby delivery. Key words:lactoferrin l lactation I delivery modes;BMI;baby sex}maternal age;pregnancy diseases 收稿日期:2018-03-16 基金项目:北京市奶牛产业创新团队:BAIC06—2018I北京市科技计划:Z171100004517013、D141100004814002。 作者简介:刘彦品(1989一),女,硕士,中级工程师,研究方向:乳品科学。 ·通讯作者:陈历俊(1967一),男,博士,教授级高级工程师,研究方向:新型乳制品和质量安全控制技术研究与开发。 堑 母乳是一种复杂的生物流体,其所含的蛋 响因素的研究将有助于改善母乳中特异性营养成 果,进一步提高母乳营养效果。本文通过双抗体 白质、脂肪、碳水化合物、矿物质、维生素等含 量适中,比例适当,易于婴儿消化吸收,对婴幼 儿体格生长、认知发展、中枢神经系统发育和视 力发育有重要意义…。母乳中含有高品质的蛋 白质,主要由酪蛋白、乳清蛋白和乳脂肪球膜 蛋白构成,乳清蛋白主要包括乳铁蛋白、6c一乳 夹心ELISA法分析了母乳中乳铁蛋白含量变化趋 势,并系统研究了泌乳时间、分娩方式、体重质 量分数(BMI)、婴儿性别、产妇年龄和孕期健康 状况对母乳中乳铁蛋白含量的影响,以期为母乳 喂养及婴幼儿配方乳粉食品的开发提供参考。 白蛋白、免疫球蛋白和血清白蛋白【引。乳铁蛋 白(Lactoferrin,LF)是母乳中重要的具有多种 生理活性的铁结合糖蛋白,约占母¥LgL清蛋白的 26%,乳铁蛋白因其独特的结构及生物学功能, 在强化机体铁吸收、对抗病原体、免疫调节以及 抗氧化等方面发挥着重要作用[31。 关于乳铁蛋白最早的研究是1939年Sorensen 等人在分离牛乳中乳清蛋白时发现一种红色组 分[41,1959年Groves用色谱得到纯的红色物质 后,确认这种红色物质是一种与铁结合的糖蛋白, 直到1961年,Blanc和Isliker从人乳中将其分离 出来,并且正式命名为乳铁蛋白。1984年时确认 了乳铁蛋白的氨基酸序列,1987年和1997年分 别确定人乳铁蛋白(human lactoferrin,HLF)和 牛乳铁蛋白(bovine lactoferrin,BLF)的三维 结构[51。日本【引、阿根廷[71、意大利[81和澳大 利亚[91等国家的研究者分别对早产儿和足月儿 母乳中乳铁蛋白的含量进行了分析,结果显示, 早产儿成熟乳的乳铁蛋白含量范围是1.9~6.5 mg/mL,足月儿成熟乳的乳铁蛋白含量范围是 1.25~4.59 mg/mL。在我国,关于母乳乳铁蛋白 含量研究的报道较少,最早莫秀芬等[101采用免 疫单扩散法检测了161例母gLgL铁蛋白的含量, 初乳中平均含量为6.14 mg/mL;成熟乳平均含量 为2.31 mg/mL。刘静等[111研究了呼和浩特市母 乳中乳铁蛋白的含量变化,初乳、过渡乳和成熟 乳中平均含量分别为3.07 mg/mL,3.06 mg/mL和 2.32 mg/mL。单炯[121等人从不同泌乳阶段、不 同分娩方式、产妇年龄对母乳中乳铁蛋白含量的 影响进行了研究,结果表明初gLgL铁蛋白含量最 高,过渡乳和成熟乳依次降低,且三组差异有统 计学意义,不同分娩方式、产妇年龄的母乳中乳 铁蛋白含量差异无统计学意义。 母乳是婴儿最好的食物,对母乳成分及其影 1对象与方法 1.1研究对象 研究对象:选择2015年3月至2016年2月 北京地区的综合性医院及妇幼保健院住院的自愿 参加此研究的乳母,同时记录分娩方式、出生情 况、BMI、婴儿性别、产妇年龄及相关疾病。本 研究已通过首都医科大学附属北京地坛医院伦理 委员会批准,所有研究对象在签署((知情同意 书 后纳入。 研究对象的纳入原则:刚出生的健康新生儿 (出生体重≥2500g);新生儿Apgar评分>7; 自愿参加并签署知情同意书。 研究对象的排除原则:新生儿经筛查患有先 天性疾病和严重传染性疾病者;父母具有严重的 慢性疾病:HIV感染者、癌症、接受骨髓或器官 移植者、最近3月内接受血液制剂输入者、出血 性疾病者、已知的先天畸形或基因缺陷者。 1.2样品采集 乳母于上午6:00-8:00对婴儿进行哺乳,并 使用吸奶器排空一侧乳房的乳汁。上午9:00- 11:00用吸奶器取早前排空一侧乳房的全部乳 汁。将前乳、后乳轻摇混合后初乳(产后0~5 d)留取10 mL、过渡乳(产后l2~14 d)留取 10 mL、成熟乳(产后1 m、3 m、4 m)留取6O mL置于冷冻管内,并于2 h内放人-80℃冰箱 冻存待测。不同影响因素采集母乳样品数量如表 1所示。 1.3样本处理及检测 检测前,样本经10000 r/min离心20min,除 去脂肪,取上清液待测。采用双抗体夹心ELISA 法,试剂盒为乳铁传递蛋白(LTF)检测试剂盒 (Cloud—Clone Corp,USCN Life Science),检测 实验由武汉云克隆科技股份有限公司完成。 表1不同影响因素母乳样本数量 Table 1 Number of breast milk samples of diferent influencing factors 1.4统计分析 采用SPSS 20.0统计学软件进行数据分析, 计量及计数资料分别采用均数±标准差表示, 多组计量资料之间采用ANOVA分析;两组计量 资料之间采用t检验,P<0.05为差异有统计学 意义。 z· 1. 皿 嘲1. 2结果与分析 2.1不同泌乳阶段母乳中乳铁蛋白含量的比较 不同泌乳阶段(产后0~5 d、12~14 d、l m、3 m、4 m)母乳中乳铁蛋白含量变化如图1 0~5d 12~14d lm 3m 4m 0~4m 不同泌乳阶段 图1不同泌乳期母乳中乳铁蛋白含量的比较 Fig.1 Comparison of lactoferrin content in breast milk at diferent lactation stages 所示。由图1可知,从0-5 d到3 m,乳铁蛋白 含量由2.45 mg/mL逐渐降低至2.20 mg/mL,但 不同阶段间无显著性差异(P>0.05)直到4 m 时显著降低至1.02 mg/mL(P<0.05)。0-4 m乳 铁蛋白的平均含量为2.23 mg/mL。 Montagne等ll3 对法国哺乳期产妇的360个 注:不同字母表示具有显著性差异(P<0.05)。 2.2不同分娩方式不同泌乳阶段母乳中乳铁蛋白 含量的比较 不同分娩方式不同泌乳阶段母乳中乳铁蛋 白含量变化如图2所示,由图2可知,阴道分娩 母乳样本进行检测,发现初乳中乳铁蛋白含量为 5.8 mg/mL,过渡乳3.1 mg/mL,成熟乳2.2 mg/ mL。印度Dawarkads等[14 测定10例足月儿母 亲的母乳乳铁蛋白含量发现:初乳、过渡乳、成 熟乳中含量分别为6.7 mg/mL,3.7 mg/mL和2.6 mg/mL。Yuen等[15 报道香港母乳中初乳和成熟 和剖宫产两组母乳中乳铁蛋白含量在0~5 d、 1 m、3 m和4 m时无显著性差异(P>0.05), l2~14 d时剖官产组母乳中乳铁蛋白含量显著 高于阴道分娩组(P<0.05),且整个0-4 m剖 宫产组母乳中乳铁蛋白平均含量显著高于阴道分 娩组(P<0.05)。 单炯等【l2 研究表明,不同分娩方式在不同 乳中乳铁蛋白的含量分别为1.28 mg/mL和1.17 mg/mL。由此可知,不同国家、不同泌乳阶段母 乳乳铁蛋白含量的下降趋势一致,但含量有差 异,本研究测定的数值低于国外水平高于香港, 尤其是初乳中的含量明显低于国外报道。 泌乳阶段母乳中的乳铁蛋白含量均无统计学意义 (P<0.05),这与我们的研究结果不一致。目前 关于生产方式对母乳中乳铁蛋白含量影响的研究 报道较少,颜建英等f16】比较顺产与剖宫产产妇 堕堑 一一Lu/∞Lu一 蜓f_=j断 初乳中抗感染因子含量的差异,表明产后48 h, 3 5 3 O 2 2 O ● 5 O 5 O O 5 0 不同婴儿性别不同泌乳阶段母乳中乳铁蛋白 含量如图4所示。由图可知,不同泌乳阶段男孩 组母乳中的乳铁蛋白含量略过高于女孩组但无显 著差异(P>0.05)。不同婴儿性别不同泌乳阶段 剖宫产组初乳中抗感染因子(SIgA、IgG、IgM、 1...._ ...J ....1....]....J....JL C3、C4)浓度明显高于顺产组。 ¨ L==|I-|. ■ L |-llL 一 一 母乳中乳铁蛋白含量变化的研究较少。王静『l7】 报道在成熟乳中,男孩组的蛋白质含量显著高于 a 女孩组,而在初乳和过渡乳中均无显著性差异。 -阴道分娩 ·剖宫产 3.5 h=II|II-L 上■■■■■I: ;●l 一 o~5d l2~14d Im 3m 4m 0~4m .三 不同泌乳阶段 ~ 皿 -男孩组 _女孩组 图2不同分娩方式不同泌乳阶段乳铁蛋白含量的比较 Fig.2 Comparison of lactoferrin content by the mode of delivery at different lactation stages 醐 O.0 0~5d l2~I4d 1m 3m 4m 0~4m 注:不同字母表示具有显著性差异(P<0.05)。 不同泌乳阶段 2-3孕前、产前和产后不同BMI乳母母乳中乳 铁蛋白的含量比较 由图3可知,孕前、产前和产后不同BMI 图4不同婴儿性别不同泌乳阶段乳铁蛋白含量的比较 Fig.4 Comparison of lactoferrin content by the sex of the baby at difierent lactation stages (≤l8,l8~25和≥25)的乳母母乳中乳铁蛋 白含量均无显著差异(P>0.05)。关于孕前、产 前和产后不同BMI对母乳中乳铁蛋白含量影响的 研究报道较少,需进一步研究。 吕 3.O 注:不同字母表示具有显著性差异(P<0.05)。 2.5不同年龄不同泌乳阶段人乳铁蛋白含量比较 g 、一 J g g 、 ●≤30 皿 ■>3O .孕前 · 前 娄0.5 脚 0.0 皿 分娩后 醐 0~5d l2~l4d lm 3m 4m 0~4m 不同泌乳阶段 0.0 图5不同年龄不同泌乳阶段乳铁蛋白含量的比较 ≤l8 l8~25 BMI ≥25 Fig.5 Comparison of lactoferrin content by the maternal age at different lactation stages 图3孕前、产前和产后不同BMI乳母的母乳中 注:不同字母表示具有显著性差异(P<0.05)。 乳铁蛋白含量的比较 Fig.3 Comparison of lactoferrin content by the BMI of pregnancy.prenatal and postpartum at different 不同产妇年龄(≤30,>30)不同泌乳阶 段母乳中的乳铁蛋白含量如图5所示。由图5可 知,不同年龄不同泌乳阶段母乳中乳铁蛋白含量 均无显著性差异(P>0.05)。文献报道牛乳中乳 lactation stages 注:没有产前BMI≤18的研究对象,不同字母表示具有显著性 差异(P<0.05)。 2.4不同婴儿性别不同泌乳阶段母乳中乳铁蛋白 含量的比较 铁蛋白含量受奶牛年龄的影响¨ 1,年龄大的奶牛 中乳铁蛋白含量较年龄小的奶牛乳铁蛋白低。而 本研究中产妇年龄对乳铁蛋白含量无显著影响, Chi中国食品添加剂 na FoodAddi 试验研究 这或许是与饮食模式相近有关;母乳和牛乳中的 乳铁蛋白受年龄影响的结果不同也有可能是由两 物种的泌乳机制不同所导致。 2.6孕期不同健康情况不同泌乳阶段乳铁蛋白含 量的比较 孕期不同健康情况不同泌乳阶段乳铁蛋白含 量如图6所示,结果显示健康和疾病两组母乳中 乳铁蛋白的含量均无显著性差异(P>0.O5)。本 文研究对象所患孕期疾病主要包括妊娠糖尿病、 甲状腺疾病、妇科疾病、妊娠高血压、羊水过少、 小腿筋挛等。关于孕期不同健康情况不同泌乳阶 段母乳中乳铁蛋白含量影响的研究报道较少。母 亲患乳房炎后,免疫球蛋白、 一乳白蛋白和血 清白蛋白的含量略有提高,总蛋白和酪蛋白含量 显著下降,总清蛋白、 一乳球蛋白及 、 和6c一 酪蛋白并没有显著减少【1 。 ·健康 -疾病 O~5d l2~14d lm 3m 4m 0~4m 不同泌乳阶段 图6孕期不同健康情况不同泌乳阶段乳铁蛋白含量的 比较 Fig.6 Comparison of lactoferrin content by the pregnancy diseases at different lactation stages 注:不同字母表示具有显著性差异(P<0.o5)。 3结论 母乳铁蛋白在初乳、过渡乳和成熟乳中的含 量呈下降趋势,乳铁蛋白含量与分娩方式有关, 过渡乳中剖宫产组母乳乳铁蛋白含量显著高于顺 产组(P<0.05),不同婴儿性别、不同孕前、产 前和产后BMI,不同产妇年龄(≤3O,>30) 和产妇孕期不同健康状况母乳中乳铁蛋白含量无 显著性差异(P>0.05)。 3 一3 目 吕一越蛏皿嘲 辞 2 2 l l 0 0 参考文献:5 O 5 O 5 O 5 0 [1】YoungWPark,GeorgeFWHaenlein.Milk andDairyProducts in Human Nutriiton:Production,Composiiton and Health【M]. USA:JohnWiley&Sons,Ltd.,2013:659-672. 【2l李慧,张岩春,戴智勇,等.母乳蛋白质研究进展【J】.中国 食物与营养,2015,21(11):68—7O. 【3 1 Guo M.Human Milk Biochemistry and Infant Formula Manufacturing Technology【M】.ElsevierLtd.,2014:19—21. 【4】Sorensen M,Sorensen S.The proteins in whey compte rendudes travaux du laboratoire de Carlsberg【J】.Ser.Chim., 1940.23(7):55—99. 【5】张彩霞,苏宜香,杨玉凤.乳铁蛋白与婴幼儿健康研究进展 [J].中国儿童保健杂志,2016,24(4):377—380. [6】Hirai Y,Kawakata N,Satoh K,et a1.Concentrations of lactoferrin and iron in human milk at different stages of lactation 【J].Journal of Nutritional Science&Vitaminology,1990,36 (6):531—44. [7]Pa R D F,Baroni A,Sambucetti M E,et a1.Lactoferrin levels in term and preterm milk[J】.Journal of hte American College of Nutriiton,2000,19(3):370—373. 【8】Mastromarino P,Capobianco D,Campagna G,et a1.Correlation between lactoferrin and beneficial microbiota in breast milk and infant’S feces[J].Biometals,2014,27(5):1077-1086. [9]Trend S,Strunk T,Hibbert J,et a1.Antimicrobial Protein and peptide concentrations and activity in human breast milk consumed by preterm infants at risk of late——onset neonatal sepsis[J].Plos One,2015,10(2):e0117038. 【10】莫秀芬,武玉梅,耿培兰,等.人乳乳铁蛋白含量【J】_吉林 大学学报(医学版),1985(4):389—391. 【11】刘静,张开屏,郭奇慧.呼和浩特市母乳中蛋白质与脂肪酸 含量的研究[J].食品研究与开发,2016,37(17):39—42. [12】单炯,王晓莉,陈夏芳,等.人乳中乳铁蛋白含量的初步 检测分析[J】.临床儿科杂志,2011,29(6):549-551. [13】Montagne P,Cuilli ̄re M L,MoM C,et a1.Changes in lactoferrin and lysozyme Levels in Human Milk During the First Twelve Weeks of Lactation[J].Advances in Experimental Medicine&Biology,2001,501(1):241-247. 【14】DawarkadasAM,SahaK,MathurNB.A comparative study of cells and anti——microbial proteins in colostrnm of mothers delivering pre—and full-term babies.【J】.Journal of Tropical Pediatrics,1991,37(37):214—219. [15】Yuen J W,Loke A Y,Gohel M D.Nutritional and immunological characteristics of lfesh and refrigerated stored human milk in Hong Kong:a pilot study[J].Clinica Chimica Acta,2012,413(19—20):1549-1554. [16]颜建英,薛晓光,卢兰青.早产母乳免疫物质和蛋白测定 [J】.海峡预防医学杂志,1998(4):9-10. 【17】王静.母乳营养成分纵向调查及其影响因素[D】.苏州:苏 州大学,2015:8-56. [181 Hagiwara Sei—ichi,Kawai Kazuhiro,And Aldra,Nagahata H ̄ime.Lactoferrin concentrations in milk from normal and subclinical mastitic COWS[J】.Journal of Veterinary Medical Science,2003,65(3):319-323. 【19】鲁慧峰.影响母乳成分变化的因素分析[J】.中国乳业,2010 (11):48-50.